核酸原位杂交可根据其检测物而分为细胞内原位杂交和组织切片内原位杂交;根据其所用探针及所要检测核酸的不同又可分为DNA-DNA, RNA-DNA, RNA-RNA杂交。但不论哪种杂交都必须经过组织细胞的固定,预杂交,杂交,冲等一系列洗步骤及自显影或酶法显色以显示杂交结果。
我们在这儿介绍的是整胚原位杂交,不同于一般的在载片上对细胞和组织切片进行探针杂交及检测的原位杂交,
原位杂交第二天
1.
1)将探针回收,放于-20C保存(通常探针可重复使用十次左右)。
2)加入50%甲酰胺/2XSSCT溶液1毫升,60℃,放置30分钟,重复一次。
3)置换2XSSCT1ml,60℃,放置15分钟。
4)置换0.2XSSCT1ml,60℃,放置30分钟,重复一次。
2.
1)用MABT洗两次,每次五分钟,放在摇床轻轻摇动。
2)室温下加1ml 1:2:7溶液,时间为一小时。
3)按1:3000的比例在1:2:7溶液中加入酶连,4C 冰箱过夜。
植物染色体原位杂交技术的应用非常广泛。例如,它可以用来研究植物基因组的结构和功能,包括基因定位、染色体重组、基因表达和基因组演化等方面。此外,该技术还可以用来检测植物中的染色体异常,如染色体缺失、重复和易位等。
植物染色体原位杂交技术的优点在于它可以直接观察到染色体上的目标DNA序列,而不需要进行PCR扩增或测序等操作。此外,该技术还可以同时检测多个目标DNA序列,从而提高检测效率和准确性。
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